一、培養基的滅菌及使用

（1）每次配置時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，并且未吸潮。

（2）培養基配置時，稱量要準確，包括鹽水的分裝要準確。

（3）一定要保證現配制現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

（4）滅菌時要保證恒溫、恒壓，同時要保證有效滅菌時間。

（5）滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用。

（6）在使用時，要根據當班次的使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然后及時調低水域溫度（先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培養基處于高溫狀態。

（7）做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死；也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便于觀察結果。

（8）每瓶培養基均要做空白。

（9）盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

（10）培養基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。

二、 做樣環境的維持

（1）大環境（房間）

1）做樣時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響超凈臺內部環境（在有通排風系統的恒溫恒濕無菌間進行操作）。

2）如果在原來的原料微生物檢測室進行做樣，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

（2）小環境（超凈臺）

1）定期清潔初效過濾器，要及時更換。

2）做樣前，將超凈臺內部進行清潔，用 75%酒精進行擦拭消毒，并提前半小時將超凈臺紫外燈打開，對超凈臺內部環境進行殺菌。

3）關紫外燈，開風機，調整合適進風量，風量不可過低。

4）每次做樣后，要對超凈臺內部進行清理、清潔，并用 75%酒精進行擦拭消毒。

5）紫外燈根據其使用壽命要及時更換。

6）做樣同時，要做上相應菌落檢測的環境空白。

7）做樣區域的選擇：

a、一般在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操作；

b、要在酒精燈火焰的外焰保護區域進行操作。

三、 工器具的潔凈度

（1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌。

（2）做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進行滅菌。

（3）接種針（環）采用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環）進行冷卻。

四、樣品的采集及檢測

（1）保證采樣器具的無菌性

1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。

2）取樣筐：使用前要用 75%酒精進行噴灑消毒

3）取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精進行擦拭消毒。

4）取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

5）電子稱表面用 75%酒精消毒。

（2）人員操作

1）保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2）取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。

3）取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

4）在要求的做樣區域進行操作。

5）做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

6）往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7）樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

8）鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解*。

9）進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

10）傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11）做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈臺對外表面進行紫外線滅菌。

12）接二步時，要注意先將接種針（環）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。

13）做樣完畢，及時放入相應培養箱進行培養，并清理清潔超凈臺。

五、 微生物的培養

（1）在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。

（2）要按照《微生物檢驗規范》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。